Recentes avanços em CRISPR/Cas9 têm demonstrado que as estratégias NHEJ, HDR e HRDR são eficientes no nocaute e edição de genes de interesse em plantas. Cana-de-açúcar ( Saccharum spp.), soja ( Glycine max) e milho ( Zea mays) estão entre as principais culturas agroenergéticas consideradas de elevada importância sócio-econômica para o Brasil. O melhoramento genético destas culturas é laborioso e demanda tempo para alcançar um evento elite. Por outro lado, a tecnologia CRISPR/Cas9 poderá contribuir com a redução no tempo de desenvolvimento de novas cultivares elites não transgênicas. A otimização desta tecnologia para uso rotineiro pode ser considerada extremamente importante para a competitividade técnico-científica da Embrapa.O objetivo deste projeto será otimizar a tecnologia CRISPR/Cas9 em cana-de-açúcar SP80-3280, soja BRS184 e milho HiII para a edição de genes de interesse via inserção de mutações sítio-dirigidas pontuais ou múltiplas.