Author(s): LOBO, A. M. B. O.; LOBO, R. N. B.

Summary: A transcriptase reversa (RT) seguida de quantificação utilizando a técnica da reação em cadeia da polimerase (qPCR) em tempo real ou, simplesmente reverse transcription-qPCR (RT-qPCR), é um método in vitro para amplificação enzimática de sequências definidas de DNA complementar obtido a partir do RNA. A técnica de RT-qPCR é uma das mais utilizadas em experimentos de quantificação da expressão gênica por ser considerado um dos métodos mais sensível e específico de quantificação gênica dos que outros utilizados para esta finalidade. No entanto, para obter resultados, pela técnica de RT-qPCR, que possam ser adequadamente analisados é necessário que o experimento tenha um desenho experimental com tratamentos, ensaios, unidade experimental e delineamento bem definidos. Muitas vezes, as considerações estatísticas, principalmente, no delineamento experimental para distribuição dos genes e das amostras (biológicas e técnicas) na placa de PCR (para controle de variação) não são consideradas e, dados gerados dessa maneira não são confiáveis. Após obtenção dos resultados da quantificação é primordial, antes de qualquer análise, avaliar a distribuição dos dados por meio de testes de normalidade. Baseado nisso, recomenda-se, para a comunidade acadêmica, como um roteiro prático para o correto delineamento experimental e a correta análise estatística dos dados para experimentos que utilizam a técnica de RT-qPCR.

Publication year: 2014

Types of publication: Booklets

Unit: Embrapa Goats & Sheep

Keywords: Expressão gênica, Expressão gênica relativa, Gene expression, Genetic processes, Genetics, Genética animal, Genética molecular, RT-PCR, RT-qPCR