Author(s): FREITAS, A. C. F. de; SANTOS, J. R. de S.; SILVA, R. S. da; BIDEGAIN, F. A.; CARNEIRO, P. C. F.; MARIA, A. N.; AZEVEDO, H. C.

Summary: Um dos problemas da técnica de inseminação artificial cervical (IAC) é o refluxo que ocorre durante este procedimento causando uma diminuição de sêmen e consequentemente dos espermatozoides disponíveis para a fertilização. A centrifugação do sêmen é uma alternativa para se depositar um elevado número de espermatozoides viáveis em pequenos volumes e que pode diminuir ou evitar o refluxo da dose inseminante na IAC. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da centrifugação da dose inseminante após a descongelação sobre a viabilidade espermática, capacitação e reação acrossomal dos espermatozoides a fim de estudar este estratégia de redução do volume da dose inseminante. Amostras de sêmen de cinco carneiros Santa Inês foram coletadas através de vagina artificial, diluídas em meio glicina-gema-leite, envasadas em palhetas de 0,25mL com concentração espermática de 400x106/mL e, congeladas de forma automatizada (refrigeração a 0,5°C/min até 5°C, estabilização por 90 minutos, congelação a 15ºC/min de 5 à -80°C e 10ºC/min de -80 à -140°C e, imersão em nitrogênio líquido à -196°C). As palhetas foram descongeladas a 37°C/30s e divididas em um grupo não centrifugado (NC) e três grupos centrifugados durante 10 minutos em três diferentes velocidades: C800, C1000 e C1200 rpm correspondendo respectivamente a 96, 150 e 217 g. Utilizando-se um microscópio de epifluorescência, foram mensurados, logo após a descongelação e incubação (37°C) por 2 e 4h, a integridade das membranas plasmática (IMP), pela combinação dos fluorocromos SYBR®green e iodeto de propídio e, o status de capacitação e reação acrossomal dos espermatozoides pela clortetraciclina (CTC). Os percentuais de IMP obtidos nos grupos centrifugados a 800 e 1000 rpm não diferiram (p>0,05) do grupo controle não centrifugado em todos os momentos. Por outro lado, a centrifugação a 1200 rpm aumentou (p<0,05) o número de células lesadas em todos os tempos de incubação. De um modo geral, a centrifugação provocou uma diminuição (p<0,05) de células não capacitadas e sem reação acrossomal. Conclui-se que os espermatozoides submetidos à centrifugação após a descongelação mantêm a sua viabilidade numa força centrífuga de 96 e 150 g, porém, até 217 g têm sua capacitação e reação acrossomal induzidas com maior frequência.

Publication year: 2015

Types of publication: Paper in annals and proceedings

Unit: Embrapa Coastal Tablelands

Keywords: Congelamento, Criopreservação, Integridade, Mamífero doméstico, Membrana plasmática, Ovino