Author(s): CARVALHO, W. A.; HONÓRIO, N. T. de B. S.; CARVALHO, C. V. de; DOMINGUES, R.; PRATA, M. C. de A.; GASPAR, E. B.

Summary: Resumo – O ensaio imunoenzimático (ELISA) é um teste imunológico, realizado em fase sólida (placa) por meio de várias etapas sequenciais, rotineiramente utilizado para diagnóstico de doenças humana ou animal. Após a sensibilização da placa, pode ser feita a etapa de bloqueio, com a adição de alguma macromolécula com a finalidade de bloquear os sítios de ligação inespecíficos. A soroalbumina bovina (BSA) e o leite desnatado são os dois agentes bloqueadores mais comumente utilizados. A maioria dos testes de ELISA utiliza a etapa de bloqueio, apesar da literatura demonstrar que esta etapa pode ser dispensável. O objetivo deste trabalho foi testar a necessidade da etapa de bloqueio com BSA ou leite desnatado, em um teste de ELISA indireto para pesquisa de IgG antiextrato de larvas de carrapatos (ELC). A adição da etapa de bloqueio não alterou significativamente os valores de absorbância, com três diluições diferentes de antígeno adsorvido à placa, nem com sete diferentes diluições de soro (analito). Recomenda-se que, ao padronizar um novo teste de ELISA para pesquisa de anticorpos bovinos, seja incluída na análise a necessidade ou não de bloqueio, já que ao eliminar uma das etapas, pode-se encurtar o tempo de ensaio e baratear o custo de execução da técnica. The need for the blocking step in ELISA assays Abstract – Most ELISA tests use the blocking step, although the literature shows that this step may be unnecessary. The objective of this study was to test the need for the blocking step with BSA or skimmed milk in an indirect ELISA test for IgG anti-tick larvae extract (TLE). The addition of the blocking step did not significantly change the absorbance values, with three different dilutions of antigen adsorbed to the plate, nor with seven different dilutions of serum (analyte). We recommend that, when standardizing a new ELISA for the search for bovine antibodies, the need for blocking be included in the analysis, as by eliminating one of the steps, the assay time can be shortened and the cost of carrying out the test can be reduced.

Publication year: 2023

Types of publication: Booklets

Unit: Embrapa Southern Livestock

Keywords: Diagnostico, Elisa, Imunidade