Summary: O bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis) e a lagarta do cartucho (Spodoptera frugiperda) são insetos que causam perdas significativas para a agricultura devido aos danos causados à cultura do algodão. Estratégias biotecnológicas utilizam proteínas envolvidas com a defesa de plantas, incluindo as d-endotoxinas e os inibidores de a-amilases (aAIs), como ferramentas no desenvolvimento de plantas resistentes aos insetos-praga. Neste contexto, a estratégia envolvendo a evolução in vitro de moléculas, por meio da técnica de DNA shuffling, tem sido aplicada para gerar moléculas variantes, com melhor toxicidade e especificidade para insetos-praga. Quatro bibliotecas combinatórias foram construídas utilizando as técnicas de DNA shuffling e Phage display. Três genes para toxinas Cry (cry1Ia12, cry3Aa1 e cry8Ha), assim como a recombinação dos genes aAI-1 and aAI-2, isolados de sementes de Phaseolus vulgaris, foram utilizados para a reação de DNA shuffling, gerando bibliotecas individualizadas. Cada uma das bibliotecas de variantes de aAIs e de toxinas Cry geraram cerca de 105-107 genes mutantes, que foram selecionados in vitro contra as a-amilases e BBMV intestinal (Brush Border membrane Vesicles) dos insetos, A. grandis e S. frugiperda. Os genes para moléculas variantes foram expressos na superfície de fagos e as proteínas recombinantes foram avaliadas em bioensaios. Os dados obtidos confirmam a eficiência da estratégia na geração de um grande número de moléculas variantes, com atividade e especificidade melhoradas para insetos-praga alvos.

Publication year: 2005

Types of publication: Booklets

Unit: Embrapa Genetic Resources & Biotechnology