Author(s): SARAIVA, N. Z.; PERECIN, F.; MÉO, S. C.; FERREIRA, C. R.; TETZNER, T. A. D.; VANTINI, R.; GARCIA, J. M.

Summary: A demecolcina é um agente anti-mitótico desestruturador de microtúbulos utilizado para enucleação química de oócitos destinados à transferência nuclear (TN). O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da exposição de oócitos bovinos à demecolcina sobre a maturação nuclear e a distribuição de grânulos corticais (GC), utilizada como indício de maturação citoplasmática. Oócitos bovinos maturados in vitro (MIV) em TCM 199 suplementado com 10% SFB, 1,0µg/mL de FSH, 50µg/mL de hCG, 1,0µg/mL de estradiol, 0,20mM de piruvato e 83,4µg/mL de amicacina, durante 24 horas receberam tratamento com demecolcina nas concentrações: 0 (controle) e 0,05ìg/mL (tratado). O grupo tratado foi exposto à demecolcina a partir de 12 horas de MIV e avaliado quanto à maturação nuclear e distribuição de grânulos corticais (GC) em quatro momentos: 0, 2, 4 e 12 horas após início do tratamento (12, 14, 16 e 24h de MIV, respectivamente). As células do cumulus foram removidas em hialuronidase (2mg/mL), e os oócitos corados com 10µg/mL de Hoechst 33342 durante 10 minutos e FITC-LCA por 15 a 20 minutos para avaliação da progressão nuclear e migração de GC para a periferia. Os resultados foram submetidos à ANOVA e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% no programa SAS v.8.2. No grupo controle, a quantidade de oócitos no estádio de MII após 12 horas (87,62%) foi significativamente superior (p<0,05) aos outros momentos avaliados: 0 (0%), 2(4,44%) e 4 (17,08%) horas. Por outro lado, no grupo tratado com demecolcina, não houve diferença significativa (p>0,05) entre 0 (0%), 2 (9,23%), 4 (8,29%) e 12 (4,92%) horas, demonstrando um provável bloqueio da meiose em metáfase I, já que se trata de um agente anti-mitótico. Quanto à distribuição dos GC, também houve comportamento diferente ao longo do tempo nos dois grupos avaliados. A média de oócitos com GC na periferia (oócitos maturos) no grupo controle, às 2 horas, foi de 4,76%, enquanto no grupo tratado a média foi de 18,42%, demonstrando tendência do grupo tratado em antecipar os eventos da migração de grânulos corticais. Porém, com 0, 4 e 12 horas não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos (Controle 8,18; 12,08 e 56,08% e Tratado 8,18; 18,41 e 61,46% de oócitos maturos, respectivamente). Dessa maneira, desde que o protocolo de enucleação química de oócitos em MI seja otimizado, o citoplasto fornecido por essa técnica poderia apresentar condições de suportar o desenvolvimento embrionário após a técnica de TN, devido aos índices satisfatórios de maturação citoplasmática. Pode-se inferir também, que a migração de grânulos corticais para a periferia dos oócitos, durante a maturação citoplasmática, foi independente da presença de microtúbulos, considerando a ação despolimerizadora da demecolcina sobre essas estruturas, sugerindo assim a mediação da migração dos GC por outros componentes do citoesqueleto, como os microfilamentos (Connors et al., Dev. Biol., 200:103, 1998; Wessel et al., Development, 129:4315, 2002). Ainda, onsiderando-se a ação bloqueadora da meiose pela demecolcina, sem influência na migração de grânulos corticais para a periferia, sugerimos o estudo da utilização desse agente na sincronização entre maturação nuclear e citoplasmática.

Publication year: 2007

Types of publication: Abstract in annals or event proceedings

Unit: Embrapa Southeastern Livestock

Keywords: Cinética, Efeitos da demecolcina, Grânulos corticais, Maturação nuclear, Oócitos bovinos