Author(s): BRITO, L. G.; OLIVEIRA, M. C. de S.; MOURA, M. M. da F.; SILVA NETTO, F. G. da S.; CAVALCANTE, F. A.; MARIM, A. D.; SOUZA, G. C. R. de; SILVA, J. L. da

Summary: Foi otimizada uma metodologia de extração de DNA genômico a partir de coágulo sanguíneo. Amostras de sangue com e sem anticoagulante EDTA para a obtenção dos coágulos sanguíneos foram coletadas em bovinos nos estados de Rondônia e Acre para pesquisa de Anaplasma marginale. Para a extração de DNA a partir do coágulo sanguíneo testaram-se dois tipos de tecido de nylon: no tratamento 1, o tecido utilizado apresentava diâmetro dos poros de 200 µm e no tratamento 2, tecido com poros de diâmetro de 1.200 µm. As amostras de sangue com anticoagulante representaram o tratamento 3, sendo este considerado como tratamento controle. Após a quebra mecânica, os coágulos sofreram centrifugação a 7.000 RPM por 15 minutos passando através das malhas dos tecidos utilizados nos tratamentos 1 e 2. A extração de DNA das amostras a partir do coágulo centrifugado e do sangue total se deu através da utilização de kit comercial para extração de DNA genômico. A quantificação do DNA obtido foi realizada através de espectrofotometria a 260 e 280 m, sendo sua integridade verificada através de eletroforese em gel de agarose. As amostras de DNA obtidas a partir dos diferentes protocolos foram utilizadas como molde para amplificação, por PCR, do gen msp5 de A. marginale. A quantidade de DNA obtida pelos tratamentos 1 e 2 foi semelhante a do sangue total (33,39 ± 1,17; 31,76 ± 0,663; 32,35 ± 0,676, respectivamente). A pureza do DNA nas amostras obtidas a partir dos tratamentos 1 e 2 foram semelhantes a do sangue total (A260/280 = 1,61 ± 0,068; 1,58 ± 0,035; 1,63 ± 0,028, respectivamente). A utilização de tecidos de organza ou tipo filó se mostrou como uma metodologia apta a ser incorporada como método de rotina para extração de DNA a partir de coágulo sanguíneo bovino por ser uma metodologia simples, rápida, barata e reproduzível para a obtenção de quantidades consideráveis de DNA de boa qualidade para utilização em estudos de epidemiologia molecular em patologias bovinas.

Publication year: 2006

Types of publication: Booklets

Unit: Embrapa Rondônia

Keywords: Coágulo sanguíneo, DNA extraction, Doenças de bovinos, Epidemiologia molecular, Extração de DNA, blood clot, bovine diseases, molecular epidemiology