Author(s): BASSO, M. F.; FAJARDO, T. V. M.; EIRAS, M.; AYUB, R. A.; NICKEL, O.

Summary: O Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) é o agente causal das caneluras do lenho da videira. Este trabalho teve como objetivo produzir antissoro policlonal a partir da proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV e avaliar a sua especificidade e sensibilidade. O gene da CP do RSPaV, com 780pb, foi previamente caracterizado. Esse gene foi subclonado no sítio de restrição EcoRI, no vetor de expressão pRSET-B e o plasmídeo recombinante foi utilizado para induzir a expressão da CP em Escherichia coli. A CP, ligada a uma cauda de seis histidinas, foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA a partir do extrato de proteínas totais extraídas de E. coli. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot, utilizando-se anticorpos comerciais contra a cauda de seis histidinas. A CP recombinante expressada in vitro apresentou massa molecular de cerca de 31kDa. A proteína purificada foi quantificada e 2,55mg foram utilizados para a imunização de um coelho. O antissoro policlonal obtido reagiu com diferentes isolados deste vírus, extraídos de videiras em ELISA indireto.

Publication year: 2010

Types of publication: Journal article

Unit: Embrapa Grape & Wine

Keywords: Canelura do lenho, Detecção, Doença de planta, Limpeza clonal, RSPaV, Sorologia, Uva, Viticultura, Vírus