A mastite bovina é considerada a principal enfermidade de rebanhos leiteiros no mundo, sendo a que causa as maiores perdas econômicas ao setor lácteo. No Brasil, estimam-se perdas de produção entre 12 e 15% devido a essa doença, o que representa mais de três bilhões de litros de leite por ano. Além disso, a mastite oferece riscos à saúde pública, pela possibilidade de contaminação do leite com resíduos de antibióticos ou com microrganismos e suas toxinas. A alta frequência de patógenos da mastite resistentes aos antibióticos tetraciclina, eritromicina, gentamicina, ampicilina e penicilina, comumente comercializados no Brasil, ficou comprovada em projeto anterior da Embrapa Gado de Leite e seus parceiros, evidenciando a importância de monitorar a resistência bacteriana aos antimicrobianos em rebanhos bovinos brasileiros. Assim, o principal objetivo deste projeto é desenvolver, padronizar e validar um método baseado em PCR multiplex para detectar os principais genes envolvidos na resistência bacteriana aos antimicrobianos supramencionados diretamente em amostras de leite bovino. Espera-se que com essa tecnologia seja possível, por meio de amplificação específica, a detecção de pelo menos seis dos genes de resistência a antimicrobianos mais prevalentes nos patógenos primários da mastite bovina, Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus. Após sua validação, essa metodologia poderá ser utilizada para monitorar a resistência aos principais antimicrobianos comercializados no mercado brasileiro para tratamento da mastite bovina. Será possível, assim, reduzir o tempo requerido para avaliação da resistência aos antimicrobianos de cerca de uma semana (isolamento bacteriano e antibiogramas) para aproximadamente 8 a 9 horas. Espera-se também que o novo método apresente sensibilidade superior ao convencional e facilidade de ampliação de escala. Essa metodologia poderá também ser empregada na detecção de genes de resistência em bactérias isoladas. Deste modo, essa ferramenta será também de grande importância para a ampliação do conhecimento sobre a base genética e os mecanismos de transmissão da resistência antimicrobiana de bactérias causadoras da mastite. O grande volume de dados que poderá ser gerado com o uso dessa ferramenta em curto período de tempo poderá orientar trabalhos futuros com foco no rejuvenescimento de antimicrobianos via nanotecnologia e outras ações para controle da doença em microrregiões específicas.