A presença de Staphylococcus spp. em leite e derivados é uma preocupação para os produtores, a indústria e órgãos governamentais responsáveis pela saúde pública. Por serem estes microrganismos importantes patógenos de mastite, o úbere do animal infectado é uma das principais fontes de contaminação do leite cru. S. aureus é a espécie mais frequentemente associada à mastite e a surtos ou casos de intoxicação alimentar. Outras espécies de Staphylococcus também têm sido associadas, mas com frequência muito menor à toxinose estafilocócica de origem alimentar. Neste projeto objetivou-se identificar e avaliar o potencial enterotoxigênico de 500 Staphylococcus spp. isolados de mastite, de leite cru refrigerado, leite pasteurizado, queijo Minas frescal e queijo de coalho e efetuar a caracterização molecular dos Staphylococcus coagulase positivos e das estirpes enterotoxigênicas. Os Staphylococcus coagulase positivos e as estirpes enterotoxigênicas foram identificados através da técnica de PCR utilizando primers específicos. Os Staphylococcus coagulase negativos confirmados como sendo enterotoxigênicos foram identificados através do sistema API®-STAPH (BioMérieux, Marcy-l`Etoile - França). Os isolados tiveram o seu perfil eletroforético determinado por eletroforese em campo pulsátil (PFGE) e 10% dos enterotoxigênicos tiveram os fragmentos de PCR sequenciados para cada gene. Os Staphylococcus que apresentaram genes de enterotoxinas clássicas foram avaliados in vitro quanto à produção de enterotoxinas as quais foram detectadas por meio de kits comerciais. Foram estabelecidos, procedimentos de PCR para identificação rápida de Staphylococcus coagulase positivos causadores de mastite e de estirpes enterotoxigênicas e um melhor conhecimento dos Staphylococcus causadores de mastite e dos enterotoxigênicos veiculados pelo leite. Esses conhecimentos poderão resultar em subsídio ao setor produtivo e órgãos responsáveis pela saúde pública na adoção de medidas ou programas de controle destes microrganismos nos rebanhos leiteiros e garantir a produção de produtos lácteos mais seguros.