Preparo de meristemas apicais de cupuaçuzeiro (Theobroma grandiflorum) para estudos de expressão de genes por hibridização in situ.
Preparo de meristemas apicais de cupuaçuzeiro (Theobroma grandiflorum) para estudos de expressão de genes por hibridização in situ.
Author(s): FALCAO, L. L.; NEVES, M. da S.; GOMES, A. C. M. M.; WERNECK, J. O. S.; DUSI, D. M. de A.; MARCELLINO, L. H.
Summary: O cupuaçuzeiro, Theobroma grandiflorum (Willd. ex Spreng.) Schum., é uma espécie nativa da Amazônia que produz uma das frutas mais populares da região, o cupuaçu. Sua polpa tem sabor e aroma muito apreciados, sendo utilizada na fabricação de uma grande diversidade de doces e na preparação de sucos. A partir das amêndoas é possível produzir o cupulate, produto similar ao chocolate. A cultura do cupuaçuzeiro tem relevante importância econômica para a região amazônica. Um dos entraves para esta cultura, no entanto, é a doença vassoura-de-bruxa (VB), causada pelo fungo Moniliophthora perniciosa, que compromete o desenvolvimento e a produção da planta. Este fungo acomete inicialmente as regiões meristemáticas do cupuaçuzeiro, particularmente o meristema da gema apical, causando superbrotamento, hipertrofia e hiperplasia dos tecidos, que acabam morrendo. Para maior entendimento do processo de infecção, genes relacionados à patogênese, particularmente os genes que codificam para as proteínas PR (pathogenesis-related), foram identificados em cupuaçuzeiro. Estudos de expressão temporal e espacial destes genes nos tecidos-alvo da infecção são necessários para acrescentar informações sobre a função de cada um no desenvolvimento da doença. Para tanto, torna-se necessário o estabelecimento de um método eficiente de hibridização in situ que permita identificar os locais e momentos específicos da expressão dos genes de interesse. Neste trabalho foi ajustada metodologia de hibridização in situ em gemas apicais de cupuaçuzeiros, desde a fixação e preparo do material vegetal até as condições de hibridização e pós-hibridização. Gemas apicais de galhos de cupuaçuzeiro foram coletadas e processadas para avaliação morfo-anatômica por microscopia de luz. Fragmento de cDNA de um gene de proteína do tipo PR foi clonado em pGEM®-T Easy e sondas de mRNA senso e antisenso marcadas com digoxigenina, produzidas por transcrição, foram utilizadas para a hibridização in situ em meristemas de cupuaçu. A técnica utilizada mostrou ser viável para a localização da expressão de genes neste tecido.
Publication year: 2019
Types of publication: Booklets
Keywords: Cupuaçu, Expressão gênica, Hibridização in situ, Meristema apical, Morfologia
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